StemGrowth series EBs形成培养基是基于APEL2和TeSR的双重优化体系，其设计聚焦于多能干细胞（PSC）在悬浮培养中形成均一胚胎样体（EBs）的生理需求。通过整合干细胞微环境调控与代谢适配原理，该体系在以下维度实现了高效EBs生成。本培养基将渗透压精准调控至270-290 mOsm/kg范围，模拟胚胎发育早期的细胞外液环境，减少因渗透压波动引起的细胞膜张力异常。葡萄糖浓度优化为4.5 g/L，平衡糖酵解（Warburg效应）与线粒体氧化代谢，通过长链IGF激活AMPK通路维持能量稳态，同时抑制乳酸脱氢酶（LDH）活性，配合StemGrowth series 抗胁迫补充剂 1000x（ML-0827S10）可在48-72小时内形成大小较为均一的EBs。

Bioformer EBs Medium

StemGrowth series EBs 形成培养基

1、 产品描述

StemGrowth series EBs形成培养基是基于APEL2和TeSR的双重优化体系，其设计聚焦于多能干细胞（PSC）在悬浮培养中形成均一胚胎样体（EBs）的生理需求。通过整合干细胞微环境调控与代谢适配原理，该体系在以下维度实现了高效EBs生成。本培养基将渗透压精准调控至270-290 mOsm/kg范围，模拟胚胎发育早期的细胞外液环境，减少因渗透压波动引起的细胞膜张力异常。葡萄糖浓度优化为4.5 g/L，平衡糖酵解（Warburg效应）与线粒体氧化代谢，通过长链IGF激活AMPK通路维持能量稳态，同时抑制乳酸脱氢酶（LDH）活性，配合StemGrowth series 抗胁迫补充剂 1000x（ML-0827S10）可在48-72小时内形成大小较为均一的EBs。

2、 产品信息

产品名称	产品货号	规格	存储/运输	保质期
StemGrowth series EBs 形成培养基	ML-0827S07	100mL	-20°C	24个月

3、 其他自备材料和试剂

4、 模基生物推荐用细胞系

H1、H9、HN4、iPSCs帕金森患者来源DY043、iPSC-EGFP等

5、 新手须知

注意事项：在使用时应始终穿戴，在处理诸如人体细胞或其他生物及有害物质时应遵循安全的实验室规程。

仅用于科学研究。

6、 使用说明

a)      使用超低粘附96孔u底板48小时形成EBs

a.1、材料和试剂：

设备：DHS水平甩板机(041269)、生物安全柜、二氧化碳培养箱等

a.2、步骤

1、   基于多能干细胞培养SOP复苏PSC，在六孔板中1:6传代三次。

2、   第四代记P4，培养3-5天每天换液维持细胞状态，使6孔板每孔细胞密度达到80%-90%。

3、   检测PSC无出现边缘分化情况、细胞核大、细胞克隆岛密集。室温预热30mLEBs形成培养基+60μL 抗胁迫补充剂 1000x ，6mL 水解酶温和消化液、6mL DPBS。

4、   使用预热的DPBS洗涤孔板中的细胞一次，吸弃DPBS。每孔加入1mL的水解酶温和消化液，37度孵育8-12分钟后，不要吸弃消化液，每孔加入1mL的EBs形成培养基含抗胁迫补充剂吹打孔板中的细胞两次，收集于15mL离心管，150g/5min 离心收集细胞。

5、   离心结束后吸弃上清，加入1mLEBs 形成培养基含抗胁迫补充剂重悬细胞，加入台盼蓝计数细胞、 检测细胞活力。

6、   1mL 细胞悬液的细胞量一般大于2*10⁷个单细胞，活力大于80%再进行下一步使用，如若活力不够， 请排查原因，如台盼蓝质量、孵育温度等。

7、   将1mL的细胞悬液加入23mL的EBs 形成培养基含抗胁迫补充剂中，吹打10次，每孔100μL加入 超低粘附96孔u底板中，使用封口膜密封孔板，于水平甩板机 1500rpm/s 离心1min。

8、   取出孔板，裁开封口膜放入37度二氧化碳培养箱中培养过夜，第二天加入100μL EBs 形成培养基不含抗胁迫补充剂，一般24小时后单细胞即可聚团，48小时以上的EBs即可进行下游分化实验。

b)     使用超低粘附6孔板和蜂窝板 72小时形成EBs

b.1、材料和试剂：

设备：DHS水平甩板机(041269)、生物安全柜、二氧化碳培养箱等

b.2、步骤

1、   基于多能干细胞培养SOP复苏PSC，在六孔板中1:6传代三次。

2、   第四代记P4，培养3-5天每天换液维持细胞状态，使6孔板每孔细胞密度达到80%-90%。

3、   检测PSC无出现边缘分化情况、细胞核大、细胞克隆岛密集。室温预热30mLEBs形成培养基+60μL 抗胁迫补充剂 1000x ，6mL 水解酶温和消化液、6mL DPBS。

4、   使用预热的DPBS洗涤孔板中的细胞一次，吸弃DPBS。每孔加入1mL的水解酶温和消化液，37度孵育8-12分钟后，不要吸弃消化液，每孔加入1mL的EBs形成培养基含抗胁迫补充剂吹打孔板中的细胞两次，收集于15mL离心管，150g/5min 离心收集细胞。

5、   离心结束后吸弃上清，加入1mLEBs 形成培养基含抗胁迫补充剂重悬细胞，加入台盼蓝计数细胞、检测细胞活力。

6、   1mL 细胞悬液的细胞量一般大于2*10⁷个单细胞，活力大于80%再进行下一步使用，如若活力不够， 请排查原因，如台盼蓝质量、孵育温度等。

7、   将1mL细胞悬浮液加入8mL的EBs 形成培养基含抗胁迫补充剂上下吹打10次重悬细胞，对于超低粘附6孔板直接形成EBs，每孔加入3mL细胞悬液，培养箱中静置30min后，放入水平摇床110rpm/s 37度培养过夜。第二天每孔再补充2mL的EBs 形成培养基不含抗胁迫补充剂，第三天观察EBs的直径大于100μm即可进行下游分化，某些细胞株系自然形成的EBs直径可能过小，可以吸弃4mL孔板中的培养基(注意不要影响EBs)，加入2mL的EBs 形成培养基不含抗胁迫补充剂培养至72小时后进行分化。

8、   对于蜂窝板形成EBs的方案，完成第6步前，准备一把无菌的镊子、一块24孔细胞培养板，将蜂窝板用无菌镊子夹入培养板的孔中(安装于中心孔)，紫外灭菌30min。对上述重悬的9mL悬液，每孔600μL 的加入安装了蜂窝板的孔板中，封口膜密封后，水平甩板机1500rpm/s离心5分钟（记得使用 24 孔板配平）。离心结束后裁掉封口膜，37度培养箱中培养过夜，第二天加入600μL EBs形成培养基不含抗胁迫补充剂再培养24小时即可进行下游分化实验。

图1:不同细胞系基于96孔u底板48小时内形成的EBs，上4x物镜，下10x物镜

图2:测试了不同细胞系使用蜂窝板 48小时内形成大小均一的EBs，均为4x物镜

V2.1版

更新时间：2025/06/24