一文详解基质胶分装方法

　　基质胶是细胞培养、类器官培养和体内实验中的重要试剂，但其对温度敏感(4℃下液态，室温或37℃会凝固)。正确的分装能避免反复冻融，确保实验一致性。今天我们来详细介绍下基质胶分装方法。

　　​​一、实验前准备​​

　　1. ​​材料与设备​​

　　预冷的基质胶(未分装的原装管)

　　预冷的无菌离心管(1.5mL或更小规格，建议使用低吸附管)

　　预冷的移液器及枪头(200μL或1mL规格)

　　冰盒或低温操作台(保持4℃环境)

　　无菌手套、酒精喷壶、记号笔

　　-20℃或-80℃冰箱(长期储存)

　　​​2. 环境准备​​

　　提前将操作台、移液器、离心管等用75%酒精消毒，置于超净工作台中。

　　​​全程在冰上操作​​，避免基质胶提前凝固。

　　​​二、分装步骤​​

　　​​1. 解冻基质胶​​

　　从-20℃取出基质胶，置于 ​​4℃冰箱过夜缓慢融化​​(避免室温或37℃解冻，防止蛋白变性)。

　　融化后轻轻颠倒混匀(​​避免剧烈震荡或产生气泡​​)。

　　​​2. 分装操作​​

　　将原装管和离心管置于冰上，用预冷枪头吸取基质胶：

　　​​单次实验用量分装​​：根据实验需求(如每管50μL、100μL)，快速分装至预冷离心管中。

　　​​避免重复冻融​​：每管分装量应满足单次实验使用，减少剩余。

　　分装后立即盖紧管盖，标记批次、浓度、日期等信息。

　　3. ​​储存​​

　　分装管置于 ​​-20℃(短期)或-80℃(长期)​​ 保存，避免反复冻融(建议最多冻融1-2次)。

　　若需频繁使用，可配制“工作液”小份储存(如稀释后的基质胶)。

　　​​三、注意事项​​

　　​​1. 温度控制​​

　　操作时间尽量缩短(建议在10分钟内完成)，避免冰上放置过久导致局部凝固。

　　若分装过程中出现凝固，需重新4℃冷藏至溶解后再操作。

　　​​2. 无菌操作​​

　　全程在超净台中进行，避免污染。

　　枪头、离心管等需无菌且预冷。

　　​​3. 避免气泡​​

　　吸液时缓慢操作，气泡会影响后续铺胶均匀性。

　　​​4. 解冻后使用​​

　　使用前从冰箱取出，4℃短暂融化后直接用于实验(如铺板)。

　　​​不可反复冻融​​，已融化的基质胶若未用完建议丢弃。

　　​​四、常见问题解答​​

　　​​Q1：分装后基质胶为何出现沉淀?​​

　　A1：可能是温度波动导致蛋白聚集，需确保全程低温操作。

　　​​Q2：能否稀释后分装?​​

　　A2：可以(如用预冷无血清培养基稀释)，但需现配现用，稀释液不宜长期保存。

　　​​Q3：如何避免分装不均匀?​​

　　A3：使用精准移液器，分装前混匀基质胶(轻柔颠倒)。

　　​​五、应用示例​​

　　​​类器官培养​​：分装50μL/管，使用时每孔加入24孔板中，37℃凝固后接种细胞。

　　​​Transwell实验​​：分装100μL/管，稀释后铺于transwell小室。

　　通过规范分装，可显著提高实验重复性并节约成本。建议初次使用者先小规模分装测试操作流程。