模基生物人胃上皮类器官培养基套装（Human Gastric Epithelial Organoid Kit Plus）是一种化学定义的细胞培养基，用于建立和维持成体干细胞来源的人胃上皮类器官。胃上皮细胞的自我更新是由干细胞及其前体细胞的增殖驱动的。人类胃上皮类器官在结构、细胞类型组成和自我更新方面表现出了胃上皮的大部分特征。因此为研究人胃上皮稳态和疾病提供了的希望。

Human Gastric Epithelial Organoid Kit Plus

人胃上皮类器官培养基套装Plus

1、 产品描述

模基生物人胃上皮类器官培养基套装Plus（Human Gastric Epithelial Organoid Kit Plus）是一种化学定义的细胞培养基，用于建立和维持成体干细胞来源的人胃上皮类器官。胃上皮细胞的自我更新是由干细胞及其前体细胞的增殖驱动的。人类胃上皮类器官在结构、细胞类型组成和自我更新方面表现出了胃上皮的大部分特征。因此为研究人胃上皮稳 态和疾病提供了的希望。

2、 产品信息

3、 其他自备材料和试剂

4、 人胃上皮类器官培养基使用说明

1、   收到类器官培养基后，将培养基置于4℃冰箱进行解冻；

2、   待培养基解冻后上下颠倒充分混匀，在生物安全柜或洁净工作台中根据日常需求量进行分装，推荐分装成10mL/管；

3、   分装后的培养基请密封后储存于-20℃，使用时取出分装的培养基放置室温平衡后即可使用。

5、 人胃上皮类器官的建立和传代培养

注意：涉及主要人体组织材料的研究必须遵循所有相关的机构和政府法规。在收集主要人体组织材料之前，必须获得所有受试者的知情同意。

a)     原代人胃上皮类器官的建立

1、   原代组织样本应在离体5min内放入装有预冷的活组织保存液（2-8℃）的样本管中，样本需要被活组织保存液覆盖（如果样品已经放在其他缓冲液或培养基中，请用预冷的活组织保存液替换整个溶液）。低温（2~8℃）运输转移至实验室。

2、   实验前先将基质胶放置4℃冰上解冻，同时取出培养基放置室温平衡。与细胞接触的离心管、试管或者塑料吸头需要用类器官培养防粘附润洗液润洗后使用。

3、   在洁净工作台中，将样本转移至培养皿中，评估获得的组织是否由上皮组成。如果存在脂肪或肌肉组织，请在解剖显微镜下使用刀或和镊子尽可能多地去除这些非上皮成分。如果没有脂肪或肌肉组织，请立即继续下一步。

4、   用上皮类器官基础培养基或含双抗的DPBS冲洗组织两次。

5、   使用镊子将组织转移至1.5mL离心管中，在冰上用无菌的将碎为0.5~2mm²大小。

6、   将剪碎的组织用50倍组织体积的重悬，并转移至15mL离心管内，吹打重悬组织块。于37℃，100rpm条件下的恒温摇床中，水平振荡消化15-30分钟，每隔10分钟观察组织消化情况，待组织块明显分散，悬液较浑浊时，取适量组织消化悬液镜检，待悬液中有较多活细胞团即可终止消化，若组织碎块较大或消化不可适当延长消化时间。消化期间可以使用不同规格（顺序从大到小如10mL、5mL、1mL）的移液管吹打组织消化悬液，帮助充分消化。当大多数组织片段能够通过1mL移液器吸头时，消化过程即完成。

7、   将FBS加入组织消化混合物中，最终浓度为2%，并使用100μm细胞过滤器过滤。

8、   收集滤液并在4℃下以250g离心3分钟。在可见的红色沉淀的情况下，吸弃上清液，加入2mL红细胞裂解液重悬沉淀，在室温下裂解红细胞1分钟，并在4℃下以250g离心3分钟。

9、   吸弃上清液并将沉淀重悬于上皮类器官基础培养基中，在4℃下以250g离心3分钟，再次重复此步骤以去除消化液和FBS，在离心前可取适量的悬液进行细胞活性检测。

10、 吸弃上清液，根据培养需求取适量细胞沉淀加入基质胶（>70%）并在冰上混匀（注意：混匀吹打的动作要轻柔，切忌产生大量气泡，常温混匀则需要控制在15秒内），混匀后置于冰上。注：基质胶应保存在冰上以防止其凝固。尽快进行该过程。大约10,000个细胞应接种在25μL基质胶中。不要过度稀释基质胶（基质胶比例应>70%（基质胶体积/总体积）），因为这可能会抑制固体液滴的正确形成。

11、 将基质胶和细胞的混合悬液点入培养孔板底部正，使用枪头稍微摊平悬液，注意避免悬液接触孔板侧壁。（推荐：96孔板接种3~10μL/孔，48孔板接种10~20μL/孔，24孔板接种20~30μL/孔）。

        注意：一旦类器官重悬于基质胶中，尽快进行种板，因为基质胶可能会在试管或移液器吸头中凝固。

12、 将培养板放入37℃和5%CO₂的培养箱中15-25分钟，让基质胶凝固。

13、 待基质胶凝固后，沿壁缓慢加入室温平衡的类器官培养基，避免破坏已凝固结构。（推荐：96孔板加入100μL/孔，48孔板加入250μL/孔，24孔板加入500μL/孔）。注：不要将培养基直接添加到基质胶液滴的顶部，因为这可能会破坏已凝固结构。

14、 将培养板置于37℃和5%CO₂的恒温培养箱中。

15、 每隔2~3天更换一次培养基，小心地从孔中吸出培养基，并加入新鲜的室温平衡的类器官培养基。

16、 密切监测类器官生长状态，理想情况下，人乳腺类器官应在7-14天内建成。

b)      人胃上皮类器官的传代培养

1、   待类器官培养到直径为100~500μm大小时（或变黑不再增大时），即可进行类器官的传代（每代约1~2周）。以下操作与细胞接触的耗材均需用润洗液润洗后使用：

2、   吸弃旧培养基，加入等体积上皮类器官基础培养基，用细胞刮刀或者移液管吸头轻轻刮下（或吹打）基质胶和类器官混合物，转移至1.5mL离心管中（每管最多收集2~3孔类器官，避免体积体积过大消化效率低），吹打5~10次，使类器官和基质胶分离，300g离心3分钟。

3、   去除上清液加入5倍于基质胶和类器官混合物体积的类器官消化液，吹打混匀后置于37℃培养箱中消化5~10分钟。取出吹打混匀，取10μL混合液镜检是否消化成小的细胞团块，消化不充分可适当延长消化时间。若要求细胞计数则需消化成单个细胞，可延长消化时间至10~20分钟后终止消化后台盼蓝染色进行细胞计数。密切监视消化过程使在类器官解离液中的孵育时间最短。

4、   消化完成后，加入5倍体积上皮类器官基础培养基吹打混匀以终止消化反应，然后250g离心3分钟。

5、   吸弃上清液，用上皮类器官基础培养基清洗2次以去除残留的消化液。次清洗可将类器官合并收集在同一个离心管中。

6、   清洗完成后将离心沉淀中的细胞进行传代培养，在细胞沉淀中加入基质胶（>70%）并在冰上混匀（注意，混匀吹打的动作要轻柔，切忌产生大量气泡，常温混匀则需要控制在15秒内），混匀后置于冰上。注意：基质胶稀释比例应在70%以上以保证培养过程中基质胶的结构稳定性。

7、   将基质胶和细胞的混合悬液点入培养孔板底部正，使用枪头稍微摊平悬液，注意避免悬液接触孔板侧壁。（推荐：96孔板接种3~10μL/孔，48孔板接种10~20μL/孔，24孔板接种20~30μL/孔）。注意：为防止基质胶室温凝固，此步骤应尽快完成。

8、   将培养板放入37℃和5%CO₂的培养箱中15-25分钟，让基质胶凝固。

9、   待基质胶凝固后，沿壁缓慢加入室温平衡的类器官培养基，避免破坏已凝固结构。（推荐：96孔板加入100μL/孔，48孔板加入250μL/孔，24孔板加入500μL/孔）。注：不要将培养基直接添加到基质胶液滴的顶部，因为这可能会破坏已凝固结构。

10、 将培养板置于37℃和5%CO₂的恒温培养箱中。

11、 每隔2~3天更换一次培养基，小心地从孔中吸出培养基，并加入新鲜的室温平衡的类器官培养基。

12、 密切监测类器官生长状态，直到类器官需要进行下一步实验

V2.1版

更新时间：2025/06/20