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Mouse Colonic Organoid Kit Plus
小鼠结肠类器官培养基套装Plus
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1、 产品描述
模基生物小鼠结肠类器官培养基套装Plus(Mouse Colonic Organoid Kit Plus)是一款用于扩增和分化小鼠结肠类器官的培养基。扩增时的小鼠结肠类器官主要由结肠干细胞和结肠祖细胞组成,分化后的小鼠结肠类器官由结肠吸收细胞、杯状细胞和少量肠内分泌细胞组成。结肠类器官在自我更新和分化能力、组织结构、细胞类型和功能方面,重现了体内结肠上皮的特征,因此是小鼠结肠研究的理想体外模型。
2、 产品信息
产品名称 | 产品货号 | 规格 | 存储/运输 | 保质期 |
小鼠结肠类器官培养基套装Plus | MA-0817H007LP | 500mL | -20°C | 24个月 |
MA-0817H007SP | 100mL |
3、 其他自备试剂和耗材
产品名称 | 产品货号 |
模基生物基质胶 | 082701/082703/082755 |
上皮类器官基础培养基 | MB-0818L07 |
类器官培养防粘附润洗液 | MB-0818L03L / MB-0818L03S |
模基生物基质胶分装预冷盒 | AB-YL1005 |
Fetal Bovine Serum (FBS) | - |
DPBS (1X), 液体,不含钙和镁 | - |
细胞过滤器100μm | - |
细胞培养板 96/48/24/12/6 孔 |
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离心管 1.5/5/15/50mL | - |
4、 使用说明小鼠结肠类器官培养基使用说明
1、 收到类器官培养基后,将培养基置于4℃冰箱进行解冻;
2、 待培养基解冻后上下颠倒充分混匀,在生物安全柜或洁净工作台中根据日常需求量进行分装,推荐分装成10mL/管;
3、 分装后的培养基请密封后储存于-20℃,使用时取出分装的培养基放置室温平衡后即可使用。
5、 小鼠结肠类器官的建立与传代培养
a) 原代小鼠结肠类器官的建立
1、 取样:小鼠断颈处死,表面喷洒酒精杀菌。在无菌条件下取出近盲肠端3~5cm结肠组织,用镊子去除肠道外部的肠系膜、脂肪,放入4℃预冷的含双抗的DPBS溶液中。
2、 清洗:使用将肠管剪开,肠腔面朝上,一只手使用夹住肠组织一端,另一只手使用片轻轻刮去肠腔表面粘液或残留的粪便,接着将结肠组织置于新的含DPBS的培养皿中清洗。将清洗后的肠碎至25mm宽,随后转移至50mL离心管中,剧烈震荡30s(垂直上下震荡90次一上一下算一次,约1s三次)弃上清,重复3次。
3、 消化:加入30mL的DPBS溶液中再加入150μL 0.5M EDTA,至EDTA终浓度为2.5mM。置4℃摇床上,80rpm,消化60min。
4、 清洗:消化完成后,静置待肠段沉淀,弃上清。加入预冷DPBS,轻柔摇匀,静置后弃上清,重复2次以去除EDTA。
5、 重悬:加入30mL预冷的含1%FBS的DPBS,涡旋30s,取上清100μm滤网过滤,收集穿过滤网的组织悬液,记为馏分1。重复收集2次,记为馏分2和馏分3。
6、 收集:300g离心力4℃离心3min。
7、 计数:弃上清,根据沉淀量使用DPBS重悬组织沉淀,取20μL悬液进行镜检和隐窝计数,计数完成后吸取包含所需隐窝量的悬液,300g离心力4℃离心3min,弃上清后置于冰上。
8、 用适量的基质胶重悬组织沉淀,推荐重悬密度为每10μL基质胶悬液包含100至200个隐窝,重悬后置于冰上,重悬时间不超过30s以避免基质胶过早凝固。注意:基质胶稀释比例应在70%以上以保证培养过程中基质胶的结构稳定性。
9、 将基质胶和组织细胞的混合悬液点入24孔板底部正,每孔30μL左右,避免悬液接触孔板侧壁。注意:为防止基质胶室温凝固,此步骤应尽快完成。
10、 将接种完成后的培养板至于37℃二氧化碳恒温培养箱中,孵育30min左右待基质胶凝固。
11、 待基质胶凝固后,沿壁缓慢加入已配制好的小鼠结肠类器官培养基,24孔板每孔500μL,避免破坏已凝固结构。
12、 将24孔板置于37℃二氧化碳培养箱中培养。每2~3天更换一次培养基,更换培养基时应避免破坏基质胶。密切监测类器官生长状态,理想情况下,小鼠结肠类器官应在5至7天内建成。
b) 小鼠结肠类器官的传代培养
1、 用经过润洗液润洗的枪头吹打刮取类器官,并将结肠类器官和培养基悬液转移至经过润洗液润洗的1.5mLEP管中。
2、 用经过润洗液润洗的枪头用力重悬类器官悬浮液,多次吹打使得类器官与基质胶分离。
3、 300g,4℃离心3min,弃上清,用经过润洗液润洗的枪头加入200μL类器官消化液并充分混匀,37℃条件下消化1-3min,消化结束后加入1mL上皮类器官基础培养基吹打混匀。
4、 300g,4℃离心3min,弃上清,再次加入1mL上皮类器官基础培养基并混匀。
5、 300g,4℃再次离心3min,弃上清后置于冰上。
6、 用适量的基质胶重悬类器官沉淀,重悬后置于冰上,重悬时间不超过30s以避免基质胶过早凝固。注意:基质胶稀释比例应在70%以上以保证培养过程中基质胶的结构稳定性。
7、 将基质胶和类器官的混合悬液点入24孔板底部正,避免悬液接触孔板侧壁,每孔30μL左右。注意:为防止基质胶室温凝固,此步骤应尽快完成。
8、 将接种完成后的培养板至于37℃二氧化碳恒温培养箱中,孵育30min左右待基质胶凝固后取出。
9、 待基质胶凝固后,沿孔壁加入提前预热的小鼠结肠类器官培养基,24孔板每孔500μL。
10、 将24孔板置于37℃二氧化碳培养箱中培养,直到类器官需要进一步的实验。
V2.0版
更新时间:2025/6/20