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模基生物小鼠结肠类器官培养基套装Plus
  • 产品型号:
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2025-07-17
  • 访  问  量:10
简要描述:

模基生物小鼠结肠类器官培养基套装(Mouse Colonic Organoid Kit Plus)是一款用于扩增和分化小鼠结肠类器官的培养基。扩增时的小鼠结肠类器官主要由结肠干细胞和结肠祖细胞组成,分化后的小鼠结肠类器官由结肠吸收细胞、杯状细胞和少量肠内分泌细胞组成。结肠类器官在自我更新和分化能力、组织结构、细胞类型和功能方面,重现了体内结肠上皮的特征,因此是小鼠结肠研究的理想体外模型。

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产品详情

Mouse Colonic Organoid Kit Plus

小鼠结肠类器官培养基套装Plus

分装后的类器官培养基需储存于-20℃,有效期两年,注意避免反复冻融;

解冻后类器官培养基可在 4°C 储存,建议在两周内使用;

类器官培养基中内含有细菌及真菌抗生素。

 

1、 产品描述

模基生物小鼠结肠类器官培养基套装PlusMouse Colonic Organoid Kit Plus)是一款用于扩增和分化小鼠结肠类器官的培养基。扩增时的小鼠结肠类器官主要由结肠干细胞和结肠祖细胞组成,分化后的小鼠结肠类器官由结肠吸收细胞、杯状细胞和少量肠内分泌细胞组成。结肠类器官在自我更新和分化能力、组织结构、细胞类型和功能方面,重现了体内结肠上皮的特征,因此是小鼠结肠研究的理想体外模型。

2、 产品信息

产品名称

产品货号

规格

存储/运输

保质期

小鼠结肠类器官培养基套装Plus

MA-0817H007LP

500mL

-20°C

24个月

MA-0817H007SP

100mL

3、 其他自备试剂和耗材

产品名称

产品货号

模基生物基质胶

082701/082703/082755

上皮类器官基础培养基

MB-0818L07

类器官培养防粘附润洗液

MB-0818L03L / MB-0818L03S

模基生物基质胶分装预冷盒

AB-YL1005

Fetal Bovine Serum (FBS)

-

DPBS (1X), 液体,不含钙和镁

-

细胞过滤器100μm

-

细胞培养板 96/48/24/12/6

离心管 1.5/5/15/50mL

-

4、 使用说明小鼠结肠类器官培养基使用说明

1、   收到类器官培养基后,将培养基置于4℃冰箱进行解冻;

2、   待培养基解冻后上下颠倒充分混匀,在生物安全柜或洁净工作台中根据日常需求量进行分装,推荐分装成10mL/管;

3、   分装后的培养基请密封后储存于-20℃,使用时取出分装的培养基放置室温平衡后即可使用。

5、 小鼠结肠类器官的建立与传代培养

a)     原代小鼠结肠类器官的建立

1、   取样:小鼠断颈处死,表面喷洒酒精杀菌。在无菌条件下取出近盲肠端3~5cm结肠组织,用镊子去除肠道外部的肠系膜、脂肪,放入4℃预冷的含双抗的DPBS溶液中。

2、   清洗:使用将肠管剪开,肠腔面朝上,一只手使用夹住肠组织一端,另一只手使用片轻轻刮去肠腔表面粘液或残留的粪便,接着将结肠组织置于新的含DPBS的培养皿中清洗。将清洗后的肠碎至25mm宽,随后转移至50mL离心管中,剧烈震荡30s(垂直上下震荡90次一上一下算一次,约1s三次)弃上清,重复3次。

3、   消化:加入30mLDPBS溶液中再加入150μL 0.5M EDTA,至EDTA终浓度为2.5mM。置4℃摇床上,80rpm,消化60min

4、   清洗:消化完成后,静置待肠段沉淀,弃上清。加入预冷DPBS,轻柔摇匀,静置后弃上清,重复2次以去除EDTA

5、   重悬:加入30mL预冷的含1%FBSDPBS,涡旋30s,取上清100μm滤网过滤,收集穿过滤网的组织悬液,记为馏分1。重复收集2次,记为馏分2和馏分3

6、   收集:300g离心力4℃离心3min

7、   计数:弃上清,根据沉淀量使用DPBS重悬组织沉淀,取20μL悬液进行镜检和隐窝计数,计数完成后吸取包含所需隐窝量的悬液,300g离心力4℃离心3min,弃上清后置于冰上。

8、   用适量的基质胶重悬组织沉淀,推荐重悬密度为每10μL基质胶悬液包含100200个隐窝,重悬后置于冰上,重悬时间不超过30s以避免基质胶过早凝固。注意:基质胶稀释比例应在70%以上以保证培养过程中基质胶的结构稳定性。

9、   将基质胶和组织细胞的混合悬液点入24孔板底部正,每孔30μL左右,避免悬液接触孔板侧壁。注意:为防止基质胶室温凝固,此步骤应尽快完成。

10、 将接种完成后的培养板至于37℃二氧化碳恒温培养箱中,孵育30min左右待基质胶凝固。

11、 待基质胶凝固后,沿壁缓慢加入已配制好的小鼠结肠类器官培养基,24孔板每孔500μL,避免破坏已凝固结构。

12、 24孔板置于37℃二氧化碳培养箱中培养。每2~3天更换一次培养基,更换培养基时应避免破坏基质胶。密切监测类器官生长状态,理想情况下,小鼠结肠类器官应在57天内建成。

b)      小鼠结肠类器官的传代培养

1、   用经过润洗液润洗的枪头吹打刮取类器官,并将结肠类器官和培养基悬液转移至经过润洗液润洗的1.5mLEP管中。

2、   用经过润洗液润洗的枪头用力重悬类器官悬浮液,多次吹打使得类器官与基质胶分离。

3、   300g4℃离心3min,弃上清,用经过润洗液润洗的枪头加入200μL类器官消化液并充分混匀,37℃条件下消化1-3min,消化结束后加入1mL上皮类器官基础培养基吹打混匀。

4、   300g4℃离心3min,弃上清,再次加入1mL上皮类器官基础培养基并混匀。

5、   300g4℃再次离心3min,弃上清后置于冰上。

6、   用适量的基质胶重悬类器官沉淀,重悬后置于冰上,重悬时间不超过30s以避免基质胶过早凝固。注意:基质胶稀释比例应在70%以上以保证培养过程中基质胶的结构稳定性。

7、   将基质胶和类器官的混合悬液点入24孔板底部正,避免悬液接触孔板侧壁,每孔30μL左右。注意:为防止基质胶室温凝固,此步骤应尽快完成。

8、   将接种完成后的培养板至于37℃二氧化碳恒温培养箱中,孵育30min左右待基质胶凝固后取出。

9、   待基质胶凝固后,沿孔壁加入提前预热的小鼠结肠类器官培养基,24孔板每孔500μL

10、 24孔板置于37℃二氧化碳培养箱中培养,直到类器官需要进一步的实验。

V2.0

更新时间:2025/6/20




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